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改善后的組織細(xì)胞固定液具有的可溶性有以下幾點(diǎn)

發(fā)布日期:2021-11-23           信息來(lái)源:鹽城溢之源生物科技有限公司

組織細(xì)胞固定液是目的在于保存細(xì)胞和組織的原有形態(tài)結(jié)構(gòu),固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對(duì)自身組織和細(xì)胞的自溶、抑制細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。固定液分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。

多聚甲醛溶液(1% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成。該固定液適合于絕大多數(shù)組織和細(xì)胞的固定,是免疫組織化學(xué)和培養(yǎng)細(xì)胞的固定液之一,它能較好的保護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及核酸。

組織細(xì)胞固定液的改善可溶性:

1、改變N端或C端:酸性肽(pH值為7時(shí)帶負(fù)電荷)我們提議;N端乙;疌端保持自由羧基,以增加負(fù)電荷。堿性肽(pH值為7時(shí)帶正電荷)C端氨基化N段自由氨基,以增加正電荷。

2、縮短或加長(zhǎng)序列:某些序列含有大量疏水氨基酸,如Trp、Phe、Val、Ile、Leu、Met、Tyr、Ala等當(dāng)這些疏水殘基大于50%通常難溶解。為增加肽的極性,加長(zhǎng)序列可能會(huì)有幫助。另外一種選擇是通過(guò)減少疏水殘基的方法降低肽鏈的長(zhǎng)度以增加極性。肽鏈極性越高,就越有可能溶于水。

3、加入可溶性殘基:對(duì)于一些極性氨基酸能改善可溶性。酸性肽可在N端或C端加上Glu-Glu.堿性肽可在N端或 C端加上Lys-Lys.若不能加入帶電荷集團(tuán)?梢詫er-Gly-Zer加到N端或C端。但是,當(dāng)肽鏈的兩端不能改變時(shí),此方法不行。

4、通過(guò)置換一個(gè)或多個(gè)殘基改變序列:肽鏈的可溶性可通過(guò)改變序列某些殘基來(lái)改善,一般對(duì)單個(gè)殘基的替換就能顯著改變其疏水性。而這種改變是較為保守的,如用Gly替換Ala。

5、選用不同“框架”來(lái)改變序列。

組織細(xì)胞固定液的樣品要求:

1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度,樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分,如有特殊成分,請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說(shuō)明。

2、待標(biāo)記樣品蕞小標(biāo)記量為1mg,是干粉,如果是液體,濃度應(yīng)大于1mg/ml。

3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉、甘氨酸等成分。

4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。

5、請(qǐng)?zhí)崆罢f(shuō)明任何特殊情況。

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