組織經(jīng)一系列的處理后，就必須進(jìn)行固定，當(dāng)然有的組織是先固定，再進(jìn)行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學(xué)的角度其簡(jiǎn)單的定義是，保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使之盡量保持細(xì)胞、組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，而從免疫組化技術(shù)的角度，固定的作用不僅是使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，盡量減少或終止外源性酶和內(nèi)源性酶的反應(yīng)；防止細(xì)胞的自溶，以免使抗原擴(kuò)散至組織間質(zhì)；以保持組織的固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)；更重要的是保持組織或細(xì)胞的抗原性，不但要使抗原不導(dǎo)致失活，而且不使抗原發(fā)生彌散的現(xiàn)象，才能在免疫組化染色時(shí)，不產(chǎn)生過深的背景，影響對(duì)陽性物的判斷。

組織細(xì)胞固定液的使用說明：
1、對(duì)于細(xì)胞樣品，去除培養(yǎng)液后，按照每六孔板一個(gè)孔加入1毫升固定液的比例，加入 4%多聚甲醛固定液。對(duì)于細(xì)胞涂片等其它細(xì)胞樣品，加入固定液的量以充分蓋住樣品為準(zhǔn)。通常室溫固定10-20分鐘即可，但固定較長(zhǎng)時(shí)間，例如1-2小時(shí)也是可以的。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?br /> 2、對(duì)組織切片，加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準(zhǔn)，或使用染色架進(jìn)行固定。通常室溫固定10-20分鐘即可完成固定，但切片較厚時(shí)可以固定較長(zhǎng)時(shí)間，例如1-2 小時(shí)。后續(xù)需使用適當(dāng)?shù)南礈煲撼浞窒礈煲匀コ龤埩舻亩嗑奂兹?br /> 3、對(duì)于組織塊樣品，浸泡入4%多聚甲醛固定液中，室溫或4℃浸泡固定2-24小時(shí)。建議不超過8小時(shí)，除非組織塊特別大，難以滲透。固定完成后，放入裝有蒸餾水的離心管中清洗，每15-30分鐘換一次，共6-8次，建議在搖床進(jìn)行，或用流水沖洗1-2小時(shí)。隨后梯度脫水，進(jìn)行包埋。如果暫時(shí)不包埋可放入70-75%的酒精中保存。